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網(wǎng)站首頁(yè)雜交試驗(yàn)中用於降低背景的封閉劑
試劑 | 用途 |
denhardt試劑 | northern雜交 |
使用rna探針的雜交 | |
單拷貝序列的southern雜交 | |
將dna固定於尼龍膜上的雜交 | |
denhardt試劑通常配製50×貯存液，過(guò)濾後保存於-20℃。可將該貯存液10倍稀釋於預雜交液（常為含有0.5%sds和100μg/ml經(jīng)變性被打斷的鮭精dna的6×ssc或6×sspe）中。50×denhardt液中含5g聚蔗糖（ficoll,400型，pharmacia）、5g聚乙烯吡咯烷酮和5g牛血清白蛋白（組分v」sigmal），加水至終體積為500ml。 | |
blotto | grunstein-hogness雜交 |
benton-davis雜交 | |
除單拷貝序列southern雜交以外的所有southern雜交 | |
斑點(diǎn)印跡 | |
1×blott（牛乳轉(zhuǎn)移技術(shù)優(yōu)化液，bovine lacto transfer technique optimizer）,是含5%膠脂奶粉和0.02%疊氮鈉的水溶液，應(yīng)保存於4℃。使用前可用預雜交液稀釋25倍。blotto不應(yīng)與高濃度的sds並用，因為後者會(huì)導(dǎo)致牛奶中蛋白質(zhì)析出。如果雜交背景不合要求，可在雜交液中加入np-40至終濃度為1%。blotto不能用作northern雜交的封閉劑，因為這一封閉劑中可能含有rna酶，其活性之高使人無(wú)法接受。 | |
注意：疊氮鈉有毒性，取用時(shí)需戴手套小心操作。含疊氮鈉的溶液應(yīng)予明確標(biāo)記。 | |
肝素 | southern雜交 |
原位雜交 | |
肝素（sigma h-7005，從豬中提取的二級(jí)產(chǎn)品或相當(dāng)等級(jí)的產(chǎn)品）用4×sspe或4×ssc溶解配製成50mg/ml的濃度，保存於4℃。肝素在含有葡聚糖硫酸酯的雜交液中用作封閉劑的濃度為500μg/ml，在不含葡聚糖硫酸酯的雜交液中的濃度為50μg/ml。 | |
經(jīng)變性並被打斷的鮭精dna | southern和northern雜交 |
把鮭魚精子dna（sigma,ⅲ,鹽鈉）溶解於水配製成10mg/ml的濃度，必要時(shí)於室溫磁力攪拌2～4h助溶。把溶液中nacl的濃度調(diào)至0.1mol/l，並用酚和酚/氯仿各抽提一次，回收水相。合dna溶液快速通17號(hào)皮下注射針頭12次，以剪切dna。加入2倍體積用冰預冷的乙醇沉澱dna。離心回收dna並重溶於水，配製成10mg/ml的濃度，測(cè)定溶液的od260值並計(jì)算出精確的dna濃度，然後煮沸10min，分裝成小份保存於-20℃。使用前置沸水浴中加熱5min，然後迅速在冰浴中驟冷。預雜交液中應(yīng)含有100μg/ml經(jīng)變性並被打斷的鮭魚精子dna | |
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